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逆转录PCR实时PCR
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实时定量PCR(real-time PCR),作为定量聚合酶链反应(Q-PCR)的一种创新方法,其核心在于通过监测DNA复制过程中的实时荧光信号来定量分析特定DNA片段。它主要依赖于荧光标记技术,有两种常见应用方式。
首先,一种方法是在双链DNA中嵌入特异荧光染料,如SYBR Green。这种染料在没有双链DNA存在时不会发光,但当它与双链结合时,荧光信号会被激活。这样,通过监测荧光强度的变化,可以实时追踪DNA的扩增过程。
另一种方式是利用Taqman探针,它是一种带有荧光基团和淬灭基团的寡核酸序列。荧光基团和淬灭基团分别位于探针的5'和3'末端。PCR扩增时,探针会与特定序列结合。在扩增早期,完整的探针会吸收荧光基团的信号。随着扩增进行,探针被切割,荧光基团和淬灭基团分离,释放出的荧光信号可以被检测到。
当实时PCR与逆转录PCR(reverse transcription PCR)结合,它能够在极少量的RNA样本中,精确地检测特定时间、细胞或组织中特定基因的表达情况。这种结合应用通常被称为定量逆转录实时PCR(quantitative RT-PCR),它极大地扩展了基因表达研究的精确度和灵敏度,对于生物学研究和疾病诊断具有重要意义。
扩展资料
RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
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