碱溶性蛋白测定方法及计算公式

2025-03-05 03:09:4290 次浏览

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 ①凯氏定氮   原理:蛋白质平均含氮量16%品与浓硫酸共热蛋白氮转化铵盐强碱性条件氨蒸用加指示剂硼酸吸收用标准酸滴定硼酸通标准酸用量即求蛋白质含氮量蛋白质含量   ②双缩脲   原理:尿素180℃脱氨双缩脲碱性溶液双缩脲与Cu2+形稳定紫红色络合物蛋白质肽键实际酰胺键故肽、蛋白质等都双缩脲(biuret)反应产蓝色或紫色复合物比色定蛋白质含量   缺点:灵敏度低品必须溶量糖类共存含脯氨酸肽显色其 精确度 较差 (数mg)且受品 硫酸铵 及 Tris 干扰 准确度 较高受蛋白质种类影响   ③Folin酚(Lowry)   Folin酚biuret 延伸所用试剂由试剂甲乙两部组试剂甲相于双缩脲试剂(碱性铜试剂)试剂乙含磷钼酸磷钨酸   碱性条件蛋白质巯基酚基等Cu2+原Cu+ Cu+能定量与Folin-酚试剂反应蓝色物质600nm比色测定蛋白质含量   灵敏度较高(约 0.1 mg)较麻烦受 硫酸铵 及 硫醇化合物 干扰 步骤各项试剂混合要特别注意均匀澈底否则误差   ④紫外   280nm光吸收:利用Tyr280nm吸收进行测定   280nm-260nm吸收差:若品液少量核酸共存按式计算:   蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 (280 260角标)   ⑤色素结合(Bradford )   直接测定:利用蛋白质与色素(Coomassie Brilliant Blue G-250)结合物光吸收用光光度进行测定   考马斯亮兰(CBG)染色测定蛋白质含量CBG 点像指示剂同酸碱度变色;酸性茶色性蓝色 CBG接蛋白质候蛋白质提供 CBG较性环境变蓝色本蛋白质越吸蛋白质CBG蓝色增强蓝色呈色强度与本蛋白质量比   间接测定:蛋白质与某些酸性或碱性色素结合形溶性盐沉淀用光光度计测定未结合色素每克品结合色素量表示蛋白质含量少   ⑥BCA   BCA(Bicinchoninc acid procedure4,4’-二羧-2,2’-二喹啉)与Lowry相似主要差别碱性溶液蛋白质使Cu2+转变Cu+进步BCA 取代Folin试剂与Cu+结合产深紫色波562 nm强吸收   优点于碱性溶液BCA 比Folin试剂稳定BCA与碱性铜离溶液结合呈色反应需步骤即完灵敏度Lowry相似   本于阴离、非离性及二性离清洁剂尿素较具容忍度较受干扰受原糖 及EDTA干扰   ⑦胶体金测定   胶体金(colloidal gold)氯金酸(chloroauric acid)水溶胶呈洋红色具高电密度并能与种物结合   胶体金种带负电荷疏水胶体遇蛋白质转变蓝色颜色改变与蛋白质定量关系用于蛋白质定量测定   ⑧其   些蛋白质含特殊 非蛋白质基团 氧化物酶含 亚铁血红素基团测 403 nm 波吸光定量 含特殊金属酶 (镉)则追踪该金属 建议自查查资料 提问没意

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