十问十答｜关于液相色谱柱使用中的常见问题解答

一、液相色谱柱初次使用活化方法

1. 反相色谱柱初次使用时，采用纯有机试剂如甲醇、乙腈，从低流速开始，逐步提升至常规使用流速，冲洗总体积建议为柱体积的20倍。此步骤有助于固定相充分湿润，碳链舒展开，使色谱柱性能达到最佳状态，并检查压力和基线。

二、正相/HILIC色谱柱活化与清洗保存

2. 正相色谱柱活化方法需考虑封存溶剂与质控方法，不同的封存溶剂活化方式有所不同。以岛津色谱柱为例，具体步骤如下。

三、HILIC模式色谱柱清洗与保存

3. HILIC模式下，清洗与保存需特别注意极性化合物的分离特性。可加大水比例，增加洗脱强度，首先使用纯水：乙腈比例50:50清洗，然后梯度过渡至95%乙腈，并最终保存在该流动相中。

四、反冲方法与保护柱选择与再生

4. 当流动相使用时间过长或缓冲盐使用较多，造成柱头严重污染时，可进行反冲。反冲程序为0.3%的磷酸乙腈水溶液，反接色谱柱进行冲洗，建议持续2小时或过夜处理。选择保护柱时，应考虑填料基质与分析柱基质的一致性，以及粒径、耐压和体积的适配性。保护柱的再生可通过10%甲醇水溶液冲洗30分钟，随后用纯甲醇冲洗30分钟实现。

五、四氢呋喃在反相色谱中的作用与影响

5. 四氢呋喃（THF）在反相色谱中具有较强的洗脱能力，能改善难分离物质的分离度与峰形。然而，THF不稳定，易生成过氧化物，导致峰形拖尾、峰分裂及鬼峰，且对填料和仪器有腐蚀作用，需控制添加浓度在20%以下。

六、鬼峰来源与消除方法

6. 鬼峰可能来源于梯度变化、仪器管线中的气泡、样品降解变质、流动相污染等。针对固定鬼峰，可采用鬼峰捕集小柱去除；对于不固定鬼峰，需对流动相进行脱气处理并更换后对仪器管线进行Purge操作；对于样品污染引发的鬼峰，需冲洗液相系统；对于残留在柱子上的未完全洗脱物质，更换洗针液。

七、保护柱与在线过滤器的区别

7. 在线过滤器使用筛板，具有较小死体积，可过滤大于筛板孔径的杂质，清洗时取下筛板超声即可；而保护柱使用保护柱芯，有更强的过滤和吸附能力，能防止色谱柱内填料污染，提供全方位保护。

八、液相色谱柱接头不匹配问题

8. 柱头类型不同，HSS型与W型接头长度有差异，影响连接匹配。选择岛津杂化耐高压接头，可轻松适应各种柱头类型，并提供最高82Mpa耐压，连接稳定。

九、UPLC色谱柱消除鬼峰的解决方案

9. 岛津推出GLC Suction Filter 2，无需增加系统体积，能有效净化流动相，吸附有机杂质，从而消除鬼峰干扰。