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高效液相色谱的术语和定义
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高效液相色谱的术语和定义如下:
术语:
色谱图,样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号是时间曲线,又称色谱流出曲线。漂移,基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。峰面积,峰与峰底所包围的面积。
分离度(resolution,R),相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。理论塔板数(theoretical plate number,N),用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。峰底,基线上峰的起点至终点的距离。
定义:
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等,其统称来说即为高柱效、高压力、高效率的液相色谱。
高效液相色谱的分离原理:
1、液固
流动相为液体,固定相为吸附剂(如硅胶、氧化铝等)。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是:当试样进入色谱柱时,溶质分子(X)和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附(未进样时,所有的吸附剂活性中心吸附的是S)。
2、离子对
离子对色谱法是将一种(或多种)与溶质分子电荷相反的离子(称为对离子或反离子)加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示:X水相Y-水相===X Y-有机相。
式中:X水相是流动相中待分离的有机离子;Y水相是流动相中带相反电荷的离子对;X Y是形成的离子对化合物。离子对色谱法解决了以往难以分离的混合物的分离问题,诸如酸、碱和离子、非离子混合物,特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。
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