凝胶过滤层析凝胶层析的应用

在生物化学实验中，凝胶过滤层析（也称凝胶层析）是一项重要的分离和纯化技术。首先，利用该方法进行脱盐处理，针对高分子化合物如蛋白质、核酸和多糖等，其中的低分子量杂质可以通过此法去除。这一过程简便快速，且对蛋白质和酶类等生物活性物质的影响较小。适合使用的凝胶包括Sephadex G-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6，柱子的比例通常为5-15，样品体积可占柱床体积的25%-30%。为了防止蛋白质在脱盐后溶解度降低导致沉淀，通常使用醋酸铵等挥发性盐类缓冲液进行平衡，之后加入样品，再以同样缓冲液洗脱，洗脱液需通过冷冻干燥法去除盐分。

凝胶层析在分离提纯方面表现出广泛应用，可用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素和生物碱等物质的纯化，利用其对热原的吸附特性，可以用于去除无离子水中的致热原，以制备高质量的注射用水。

此外，该技术还可用于测定高分子物质的分子量。通过将一系列已知分子量的标准品与样品一起层析，测量每分钟成分的洗脱体积，并将洗脱体积对分子量的对数作图，可以得到分子量的标准曲线。对于未知物质，只需将其加入已建立标准曲线的凝胶柱中，根据洗脱体积在标准曲线上查找，即可确定其分子量。

在高分子溶液的浓缩过程中，Sephadex G-25或50干胶常被用于稀溶液中。高分子物质会被阻留在凝胶颗粒外部，而低分子量物质和水分则会进入凝胶粒子的孔隙。通过离心或过滤，分离出溶胀的凝胶，从而得到浓缩的高分子溶液，这是凝胶过滤层析在实际应用中的又一重要应用。

扩展资料

凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。也叫做分子排阻层析（molecular-exclusion chromatography）。一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。 一般是大分子先流出来，小分子后流出来。